14 val. VU Gyvybės mokslų centro R-401 auditorijoje (Saulėtekio al. 7, LT-10257 Vilnius) GRETA BIGELYTĖ anglų kalba gins daktaro disertaciją „Mažosios CRISPR-Cas nukleazės: nuo charakterizavimo iki pritaikymo”. Moksliniai vadovai: Dr. Giedrius Gasiūnas, nuo 2017 10 01 iki 2021 05 21. Dr. Tautvydas Karvelis. Mokslinis konsultantas – prof. dr. Virginijus Šikšnys.
Disertacijos anotacija: Prokariotinės CRISPR-Cas – angl. clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR associated, sistemos suteikia adaptyvią apsaugą prieš svetimas nukleorūgštis. RNR molekulėmis programuojamos CRISPR-Cas nukleazės gali būti nukreiptos perkirpti bet kurį dvigrandinį (dg) DNR taikinį, todėl šios nukleazės yra plačiai pritaikomos genomo redagavimo srityje. Vis dėl to, dažniausiai naudojamų Cas9 ir Cas12a baltymų dydis (1300 – 1500 aminorūgštys) išlieka viena didžiausių kliūčių, ribojančių jų pristatymą į tikslines ląsteles. Neseniai atrastos, perpus mažesnės nei Cas9 ir Cas12a, Cas12f nukleazės tapo patrauklia alternatyva šiai problemai išspręsti. Šioje disertacijoje pristatoma 10 išskirtinai kompaktiškų (422–603 aminorūgščių) CRISPR–Cas12f nukleazių. Taip pat pirmą kartą parodėme, kad Cas12f baltymai kerpa dgDNR nuo PAM (angl. protospacer adjacent motif) priklausomu būdu. Dvi, Syntrophomonas palmitatica (Sp) ir Acidibacillus sulfuroxidans (As), Cas12f1 nukleazės sėkmingai riboja plazmidžių transformaciją į heterologines Escherichia coli ląsteles. Todėl būtent šios, SpCas12f1 ir AsCas12f1, nukleazės buvo atrinktos tolimesniam biocheminiam charakterizavimui, kuris leido pademonstruoti sėkmingą genominių DNR taikinių kirpimą žmogaus ir augalų ląstelėse su SpCas12f1. Apibendrinant, šios savybės atveria kelią miniatiūrinių Cas12f pagrindu veikiančių genomo redagavimo įrankių kūrimui.
Disertacijos gynimą stebėti galite naudodamiesi šia nuoroda.